应用研究
复发性血栓与蛋白C基因565位点突变相关性研究
王海平 张素平 阙敢波* 张奕平 刘全芳 张洪彬
【摘要】 【摘要】目的 对1例复发性血栓患者及其家系成员进行抗凝血酶和蛋白C基因突变检测。方法 采用发色底物法检测先证者及其家系成员血浆A T活性和PC活性，采用PCR法对先证者及其家系成员AT基因的7个外显子及其侧翼内含子序列和PC基因的9个外显子和8个内含子序列分别进行扩增，PCR产物纯化后直接测序检测基因突变。
【关键字】 静脉血栓,复发性血栓,抗凝血酶,蛋白C,基因突变
中图分类号：文献标识码：文章编号：
[Abstract] Objective To detect the mutations of antithrombin and protein C gene in a patient with recurrent thrombosis and its family members. Methods The plasma AT activity and PC activity of probands and their family members were detected by chromogenic substrate method. The seven exons and their flanking intron sequences of the AT gene of proband and their family members were detected by PCR. The 9 exons and 8 intron sequences of the PC gene were amplified separately, and the PCR products were purified and directly sequenced to detect gene mutations. Results Whole-genome sequencing showed that there were a total of 3 mutations in the protein 565 gene of the family member, including the proband. Biochemical tests showed that family members carrying mutations in the 565 locus had decreased protein C activity. Conclusion Considering the mutation of protein 565 gene 565 is a predisposing factor for recurrent thrombotic events.
静脉血栓（venous thromboembolism，VTE）作为临床常见的一种疾病[1]，表现为血液在深静脉腔内异常凝结和管腔阻塞等造成的回流障碍，同时可伴有远端静脉高压、肢体肿胀、疼痛或浅静脉扩张等症状。VTE的早期报道多见于高加索人群。流行性学数据显示亚洲地区VTE的病发率在（14~57）/（1000000人•年），且存在地域差异[2-6]。此外，人口老龄化、手术复杂度增加、剖腹产率上升、肥胖、肿瘤患病率上升等诸多因素使得亚洲地区VTE的发病率成逐年上升趋势，但现有风险因素仍不足以解释VTE的发生。抗凝系统是人类机体重要的防御系统，与纤溶系统共同维持机体出血和缺血之间的平衡。其中，蛋白C作为抗凝系统重要的组成成员，通过阻断因子Va和因子VIIIa活性发挥抗凝作用。此外，蛋白C还参与机体的一些炎症反应。PROC基因编码蛋白C，位于2q14.3，现已发现至少270个突变位点与蛋白C活性相关[7]。根据PROC基因突变情况将蛋白C分为Ⅰ型和Ⅱ型：Ⅰ型表现为蛋白C合成减少，Ⅱ型表现为蛋白C活性降低。565位点突变使得对应碱基由C变为T，编码氨基酸由精氨酸变为色氨酸，最终影响蛋白C活性。目前关于此位点的报道较少，尤其是在中国人群。本文我们报道了福建龙岩地区一个家族两代蛋白C基因565位点突变与VTE的研究。
1 对象与方法
1.1 家系一般资料
先证者，男，汉族，31岁，BMI 22.56，平素体健，无高血压、糖尿病、高血脂、贫血，无过敏史，无抽烟、饮酒，肝肾功能正常，反复下肢深静脉血栓两次，第一次骨折后左下肢深静脉血栓，第二次无诱因出现右下肢肿胀经诊断右下肢深静脉血栓形成。2016-2-13来我院就诊，诉右下肢肿痛2 d。6年前左脚骨折20余天后出现左下肢肿胀疼痛，当地医院诊断“左下肢深静脉血栓形成”，予长期口服华法林钠2.5 mg qn，期间未规律监测INR，2年后自行停药，偶感左下肢酸胀不适。入院行双下肢静脉彩超示：右侧髂总静脉、右下肢静脉多发血栓形成；左侧股总、腘静脉陈旧性血栓形成并血流再通（图2）。予以达肝素钠注射液5000 IU q12h抗凝治疗。2016-2-14行“B超引导右小隐静脉穿刺置血管鞘+下腔静脉滤器置入术＋左下肢深静脉置管溶栓术”，术中尿激酶20万单位灌注溶栓，术后尿激酶溶液25 mL/h经溶栓管泵入溶栓治疗5 d，达肝素钠注射液5000 IU q12h抗凝治疗，2016-2-19停用尿激酶，口服华法林钠片3 mg qn po。2016-2-22局麻下行“下腔静脉滤器取出术”。2016-2-23双下肢静脉彩超示：右侧髂静脉、右下肢深静脉未见明显血栓；左侧股总、腘静脉陈旧性血栓形成并血流再通（图3）。患者要求出院，门诊随访治疗。本研究内容获院内伦理委员会批准，所有家族成员均签署知情同意书。
